产品货号：
SNM127
中文名称：
超微量Na+K+–ATP酶测定试剂盒(测组织、普通细胞)
英文名称：
Na+K+–ATPase assay kit
产品规格：
50管/25样|100管/50样
发货周期：
1～3天
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本试剂盒可测各种动物组织、培养细胞等样本中Na+K+-ATP酶活性。
ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用，机体在缺氧及一些疾病状态下，此酶活力发生一系列改变，另外有些遗传疾病也与此酶活力有关。
ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。
试剂五乙液在冬天或4℃长时间保存时可能会出现凝胶状物质，37℃溶解不了，可将其60℃左右水浴10分钟即可完全溶解；甲液、乙液应防止磷污染。
注：在比色前，将比色皿用自来水冲洗10余次，再用双蒸水冲洗4～5次，以免磷污染。
如果你的样本数量很多可以采用简便操作法。
注：在比色前，将比色皿用自来水冲洗10余次，再用双蒸水冲洗4～5次，以免磷污染。
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ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用，机体在缺氧及一些疾病状态下，此酶活力发生一系列改变，另外有些遗传疾病也与此酶活力有关。
ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。
| 组分 | 50管/24样 | 100管/48样 | 保存 | |
| 试剂一 | 液体 | 13mL | 13mL×2 | 4℃保存6个月 |
| 试剂二 | 液体 | 4mL | 4mL×2 | 4℃保存6个月 |
| 试剂三 | 粉剂 | 粉剂×4 | 粉剂×8 | -20℃保存6个月 |
| 试剂四 | 液体 | 5mL | 5mL×2 | 4℃保存6个月 |
| 试剂五 | 甲液 | 7mL×4 | 7mL×8 | 4℃保存6个月 |
| 乙液 | 6mL×4 | 6mL×8 | 4℃避光保存6个月 | |
| 试剂六 | 液体 | 50mL | 50mL | 室温保存6个月 |
| 试剂七 | 10mmol/L标准磷贮备液 | 5mL | 5mL | 4℃保存6个月 |
| 试剂十 | 贮备液 | 0.1mL×2 | 0.1mL×4 | 4℃保存6个月 |
| 稀释液 | 0.9mL×2 | 0.9mL×4 | 4℃保存6个月 | |
| 双蒸水 | 40mL | 40mL | 4℃或室温保存 | |
试剂五乙液在冬天或4℃长时间保存时可能会出现凝胶状物质，37℃溶解不了，可将其60℃左右水浴10分钟即可完全溶解；甲液、乙液应防止磷污染。
- 试剂三应用液的配制：用时每支试剂三粉剂加双蒸水1mL，充分溶解。用不完-20℃以下可保存一周。
- 试剂十应用液的配制：取一支试剂十稀释液加入一支试剂十贮备液中，用不完的4℃保存。
- 0.1μmol/mL标准磷应用液的配制：用时将10mmol/L磷贮备液100倍稀释，即取0.1mL加双蒸水至10mL。
- 0.02μmol/mL磷标准液的配制：用时将0.1μmol/mL磷标准液用双蒸水5倍稀释，即取0.1μmol/mL磷标准液1mL加双蒸水4mL。
- 基质液的配制：按试剂一︰试剂二︰试剂三 ＝ 260︰80︰80比例混合。需多少配多少，现用现配。
- 显色剂的配制：用时取一瓶试剂五甲液加入一瓶已预温好试剂五乙液中，充分混匀，需提前0.5小时配制，2～8℃条件下至少可保存5天，配好的显色剂的量够做13个管子（如果你的样本量很少，所需的显色剂的量较少，那么你可以按试剂五中的甲液︰乙液=7︰6的比例自行配制显色剂，需多少配多少（按比例配制显色剂时要防止磷污染，最好用专用吸嘴）。
- 组织的前处理：
准确称取组织重量，按重量(g):体积(mL) ＝ 1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液（即10%的匀浆上清液），再用生理盐水10倍稀释成1%，同时用考马斯亮蓝试剂(自备)测定组织蛋白。如果预试结果太高，再将1%的组织匀浆稀释成不同浓度再进行预试后再决定取样浓度。 - 培养细胞的前处理：将培养细胞消化，离心，弃上清，留下层细胞，每管加0.2～0.3mL生理盐水或匀浆介质制备成107/cm3细胞悬液，即107/mL，再进行破碎。破碎细胞的方法有三种：
① 用匀浆器匀浆。
② 用超声粉碎器粉碎。
③ 反复冻溶3次（第③种方法有时会影响酶活力）。
制备好的细胞悬液不需要离心，同时用考马斯亮兰试剂(自备)测定组织蛋白。再将细胞匀浆液稀释成不同浓度进行预试，根据预试结果决定取样浓度。
[注1]：在测试加样前要摇匀后取样。
[注2]：不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂作为样本匀浆或稀释样本。
[注3]：预试结果将绝对吸光度值（A测定—A对照）控制在0.2左右为宜。
- 酶促反应：
成分 对照管 测定管 双蒸水 0.16mL 0.12mL 样本 0.1mL 试剂十应用液 0.04mL 试剂一 0.26mL 0.26mL 试剂二 0.08mL 0.08mL 试剂三应用液 0.08mL 0.08mL 混匀，37℃准确反应10分钟。 试剂四 0.1mL 0.1mL 样本 0.1mL 混匀，3500转/分，离心10分钟，取上清定磷。 - 定磷反应：
成分 空白管 标准管 对照管 测定管 双蒸水 0.3mL 0.02μmol/mL磷标准液 0.3mL 上清液 0.3mL 0.3mL 显色剂 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL 混匀，室温静止2分钟。 试剂六 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL 混匀，室温静置5分钟，在636nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。
注：在比色前，将比色皿用自来水冲洗10余次，再用双蒸水冲洗4～5次，以免磷污染。
如果你的样本数量很多可以采用简便操作法。
- 酶促反应：
成分 对照管测 定管 双蒸水 0.16mL 0.12mL 样本 0.1mL 试剂十应用液 0.04mL 基质液 0.42mL 0.42mL 混匀，37℃准确反应10分钟。 试剂四 0.1mL 0.1mL 样本 0.1mL 混匀，3000～4000转/分离心10分钟，取上清定磷。 - 定磷反应：
成分 空白管 标准管 对照管 测定管 双蒸水 0.3mL 0.02μmol/mL磷标准液 0.3mL 上清液 0.3mL 0.3mL 显色剂 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL 混匀，室温静止2分钟。 试剂六 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL 混匀，室温静置5分钟，在636nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值A。
注：在比色前，将比色皿用自来水冲洗10余次，再用双蒸水冲洗4～5次，以免磷污染。
- 单位定义：
规定每小时每毫克组织蛋白的组织中ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。即微摩尔磷/毫克蛋白/小时(μmolPi/mgprot/hour)。 - 计算公式：
NaK-ATP酶活力
(U/mgprot)＝ A测定－A对照 ×C标准× 60 × V反总 ÷Cpr A标准－A空白 T V样 - C标准为磷标准液浓度：0.02μmol/mL；
- T为酶促反应时间：10分钟；
- V反总为酶促反应体系总体积：0.78mL；
- V样为取样量：0.1mL；
- Cpr为样本蛋白浓度，mgprot/mL(prot指蛋白)。
- C标准为磷标准液浓度：0.02μmol/mL；
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